Browsing by Author "Seixas, C."
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- Caracterização das explorações de ovinos Serra da EstrelaPublication . Esteves, F.; Santos, C.; Seixas, C.; Vala, HelenaA raça ovina serra da estrela tem o seu solar ao largo da nascente da bacia hidrográfica do rio Mondego. Com um efectivo actual de cerca de 90000 cabeças e encabeçamento de 35,8, esta raça autóctone de vocação predominantemente leiteira, apresenta na rusticidade, uma característica fundamental para a sua adaptação ao sistema semi-extensivo em que é explorada. A alimentação é feita à base de pastagens naturais e melhoradas, forragens e concentrados apenas durante o alavão. Nos ovis predominam as construções próprias para o efeito, utilizando tanto o sistema de camas de mato ou palha, como o ripado. As condições higiosanitárias da maioria das explorações são ainda muito deficitárias quer ao nível da qualidade das estruturas quer ao nível do maneio dos animais. Aquando da selecção das explorações foram tomados em conta, entre outros, critérios como a dimensão do efectivo, a indemnidade em relação à Brucelose, o tipo de maneio, bem como a existência de suspeita clínica O sobredimensionamento das explorações, a não existência de maternidades e parques de recria, comedouros e bebedouros mal dimensionados, a ausência de instalações para isolamento de animais doentes ou suspeitos, foram também identificados como factores predisponentes ao aparecimento e manutenção nas explorações de doenças com características epidemiológicas semelhantes à paratuberculose. O exame clínico de alguns animais destas explorações revelou a existência de animais com acentuadas quebras de produção, emagrecimento progressivo, diarreia terminal e edema intermandibular, compatíveis com um quadro sintomático de Paratuberculose ovina.
- Estudo Anatomohistopatológico da Paratuberculose em ovinos Serra da EstrelaPublication . Vitória, A.; Vala, Helena; Santos, C.; Esteves, F.; Seixas, C.; Afonso, A. F.; Ribeiro, MTFA; Amado, A.A Paratuberculose é de uma doença crónica, de difícil diagnóstico, causadora de importantes perdas económicas. Por haver suspeita da sua presença nos efectivos ovinos da região da Serra da Estrela, é fundamental estabelecer um protocolo de diagnóstico rápido, eficaz e fiável, de modo a poderem ser identificados os rebanhos portadores de casos de doença e, posteriormente, elaborar-se um plano que permita o seu controlo. Este trabalho consistiu na aplicação de métodos de diagnóstico anatomopatológicos a 34 animais previamente submetidos a dois testes serológicos, ELISA e AGID, aos quais foi realizada a necrópsia. Assim, foram contemplados vários parâmetros de diagnóstico que incluíram a observação do hábito externo antes da realização da necrópsia, necrópsia, exame histopatológico, método de coloração de Ziehl-Neelsen, bem como o método de Imunohistoquímica, cujos resultados se apresentam. Teve como objectivo o estudo anátomopatológico de uma amostragem de animais soropositivos, negativos e duvidosos, de modo a avaliar o padrão lesional macro e microscópico, a presença de bactérias álcool-ácido-resistentes na coloração de Ziehl-Neelsen, bem como a marcação com o anticorpo anti-MAP, de modo a comparar estes resultados com os da serologia e assim contribuir para o objectivo último de estabelecer um protocolo de diagnóstico rápido, eficaz. Dos trinta e quatro animais enviados para necrópsia, verificou-se que os mesmos apresentaram reacção positiva ao ELISA em dezasseis casos, duvidoso num e foi negativo em doze animais. O AGID foi positivo apenas em quatro animais, e negativa em vinte e seis animais. O exame do hábito externo foi compatível em vinte e sete animais e não compatível em seis animais. O exame macroscópico foi compatível em vinte e oito animais e foi não compatível em três animais. A histopatologia foi compatível em vinte e um animais e foi não compatível em dez animais. Na coloração de Ziehl-Neelsen observaram-se bactérias álcool-ácido resistentes em dezoito animais e não se observaram bactérias álcool-ácido resistentes em treze animais. Na imunohistoquímica dois animais foram positivos.
- Estudo anatomohistopatológico e microscópico.Publication . Vala, Helena; Afonso, A. F.; Esteves, F.; Santos, C.; Seixas, C.; Amaral, M.; Albuquerque, T.; Botelho, A.; Amado, A.Este trabalho consistiu na aplicação de métodos de diagnóstico anatomopatológicos a 46 animais previamente submetidos a dois testes serológicos, ELISA e AGID, aos quais foi realizada a necrópsia. Foram contemplados vários parâmetros de diagnóstico que incluíram a observação do hábito externo antes da realização da necrópsia, exame macroscópico, exame histopatológico, método de coloração de Ziehl-Neelsen e método de Imunohistoquímica, cujos resultados se apresentam. Teve como objectivo o estudo anátomopatológico de uma amostragem de animais soropositivos, negativos e duvidosos, de modo a avaliar o padrão lesional macro e microscópico, a presença de bactérias álcool-ácido-resistentes detectadas pelo método de coloração de Ziehl- Neelsen, bem como pela detecção imunohistoquímica com o anticorpo anti-MAP, de modo a comparar estes resultados com os da serologia e assim contribuir para o objectivo último de estabelecer um protocolo de diagnóstico rápido, eficaz. A maioria dos animais submetidos a necrópsia, apresentou um quadro de magreza e mau estado geral, seguindo-se os sinais de diarreia ou de fezes moles. Na grande maioria dos animais submetidos a necrópsia, foram evidentes lesões ganglionares, principalmente adenomegália, as quais correspondiam a lesões microscópicas de linfadenite granulomatosa, seguindo-se o pregueamento que não desaparecia quando a superfície da mucosa era esticada e que correspondia a inflamação granulomatosa difusa na mucosa e submucosa do intestino e da válvula íleo-cecal. Dos 46 animais enviados para necrópsia, 43 apresentavam resultados de serologia, tendo-se verificado que 20 (46,5%) apresentaram reacção positiva ao teste de ELISA, 2 foram duvidosos e 21 (47,7%) foram negativos. O AGID foi positivo apenas em 4 (9,3%) animais e negativo em 39 animais (90,7%). O exame do hábito externo foi compatível em 34 animais (75,6%) e não compatível em 11 animais (24,4%). O exame macroscópico foi compatível em 40 animais (93%) e foi não compatível em 3 animais (7%). O exame microscópico histopatológico foi compatível em 26 animais (60,5%) e foi não compatível em 17 animais (39,5%). No método de coloração de Ziehl-Neelsen observaram-se bactérias álcool-ácido resistentes em 20 animais (46,5%) e não se observaram bactérias álcool-ácido resistentes em 23 animais (53,5%). Na técnica de imunohistoquímica identificaram-se também 20 animais positivos (46,5%) e 23 animais (53,5%) foram negativos.
- Immunohistochemical studies of epidermal differentiation, cell proliferation and p53 mutation in bovine ocular squamous cell carcinomaPublication . Vala, Helena; Afonso, A. F.; Esteves, F.; Santos, C.; Seixas, C.; Amaral, M.; Albuquerque, T.; Botelho, A.; Amado, A.The purpose of the present study was to immunocharacterize Bovine Ocular Squamous Cell Carcinoma neoplastic cells, in terms of proliferation index and DNA damage, using two human primary antibodies anti- Ki67 antigen of the cell cycle and anti- p53. Ki67 is a nuclear antigen expressed in dividing cells during late G1, G2, S-phase and M-phase that disapears rapidly after mitosis. p53 is a tumor supressor protein that plays a key role in the control of the DNA damage acting as a supressor of tumour cell proliferation, enhancing genetic stability. Mutation of the gene that codes for p53 provides an extended intracellular half-life of the protein and greater stability, therefore increasing its expression. Tumours for this study were obtained at the slautherhouse, in Ponta Delgada, Azores. A total of thirty samples were colected from eighteen bovine. Immunohistochemical analysis was performed in parafin embeded sections of formalin fixed material, using the Avidin-Biotin-Peroxidase method (ABC). Primary antibodies used were anti-human p53 (NCL – p53 CM-1, NOVOCASTRA, UK) and anti-human Ki67 (NCL – Ki67p, NOVOCASTRA, UK), both policlonal. Positivity for both Ki67 and p53 was evaluated quantitatively and semi-quantitatively, respectively.
- Inquérito epidemiológico em explorações suspeitas de paratuberculosePublication . Pereira, I.; Santos, C.; Esteves, F.; Vala, Helena; Seixas, C.; Afonso, A. F.; Ribeiro, MTFA; Amado, A.A Paratuberculose ou doença de Johne, causada pelo Mycobacterium avium subespécie Paratuberculosis, é uma enterite crónica e incurável dos ruminantes. As perdas económicas a ela associadas e a eventual relação com a doença de Crohn em humanos justificam cada vez mais o estudo exaustivo desta doença. Este trabalho consistiu na realização de um inquérito epidemiológico em treze explorações de pequenos ruminantes da região da Serra da Estrela, com suspeita de paratuberculose, com o objectivo de caracterizar estas mesmas explorações, tendo-se focado em particular a caracterização do efectivo, o trânsito animal, as operações de maneio, e a história clínica do efectivo. Foi ainda incluído um ponto relativo à envolvente humana das explorações. Posteriormente foi efectuada a análise sumária das respostas obtidas. Do estudo realizado verificou-se que não há possibilidade de partilha de pastagens entre efectivos; a transumância é praticada em 8 das 13 explorações; Quanto aos sinais de doença observados no efectivo, 6 dos inquiridos referiram a diarreia, associada a emagrecimento progressivo. Sete dos inquiridos afirmaram não fazer o isolamento de animais suspeitos de doença; Quanto à tentativa de chegar a um diagnóstico, apenas 4 produtores afirmaram ter realizado exames complementares aos animais, tendo sido submetidos a necrópsia, e noutros 2 tendo-se efectuado provas serológicas. Relativamente à envolvente humana da exploração, verificou-se que não existiam casos de doença de Crohn, nem sinais compatíveis com a mesma, tendo no entanto 6 dos proprietários afirmado conhecer a doença.
- Paratuberculosis in Sheep from Serra da Estrela RegionPublication . Vala, Helena; Santos, C.; Esteves, F.; Albuquerque, T.; Afonso, A.; Botelho, A.; Seixas, C.; Amaral, M; Amado, A.Being Paratuberculosis a chronic disease of difficult diagnosis and having suspicious of her presence in Serra da Estrela ovine’s effectives, it’s essential to prove this fact and establish a fast, efficient and viable diagnosis protocol, to be able to identified flock’s carriers of disease cases and, subsequently, being developed an eradication plane that allows her control. Therefore, in this work were tested several diagnosis’ methods but this report reflects mostly on the histopatological diagnosis’ methods, including the general condition observation before necropsy elaboration, necropsy, histopathological exam and Ziehl-Neelsen’s stain method, as well as Immunohistochemical`s method. A analogy with serological diagnosis was made. Of the 46 animals sent to necropsy, 20 showed positive reaction to ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 2 doubtful reaction and 21 were negative. The AGID was only positive in 4 animals. The symptoms were compatible in 34 animals. The macroscopic’s exam was compatible in 40 animals. The histopathology was compatible in 26 animals. The Ziehl-Neelsen’s stain of tissues revealed acid fast bacterias in 20 animals. In Immunohistochemical method 20 animals were positives.
- Preventive measures in small ruminant farms suspected of paratuberculosisPublication . Esteves F, Seixas C, Amado A; Vala, Helena; Santos, C.; Cruz, R.; Albuquerque, T.; Afonso, A.; Botelho, A.; Seixas, C.; Amado, A.Paratuberculosis or Johne's disease caused by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis chronic disease, incurable, difficult to diagnose in ruminants. Economic losses, direct and indirect, associated with it and possible links to Crohn's disease in humans, justifying more and more exhaustive study of this disease, and the establishment of preventive measures. An epidemiological survey was conducted on 13 sheep farms or effectives in the region of Serra da Estrela, in Portugal, with clinical suspicion of paratuberculosis, with the objective to to identified flock’s carriers of disease cases and, subsequently, characterize and identify the main risk factors and implement prophylactic measures, as part of an eradication plane that allows it’s control. Therefore, in this work were tested several diagnosis’ methods, that included serological methods, histopatological diagnosis’ methods, immunohistochemical`s methods, direct PCR and bacteriological culture. The results were presented in details and revealed positive animals in the different diagnostic techniques. The serological methods revealed, by Enzime Linked Immunosorbent Assay (ELISA), 235 positive samples (9.1%) 45 doubtful (1.7%), in 2589 samples and by Agar Gel Immunodiffusion (AGID) 30 positive samples. In histopathological exam, considering the presence of at least one of the microscopic lesions characteristic of the disease, we classified 26 (60,5%) animals as compatible with Paratuberculosis. In Ziehl-Neelsen method was observed alcohol-acid-resistant bacteria in 20 animals (46,5%). In immunohistochemical method, also 20 animals (46,5%) revealed the presence of MAP. The PCR analysis of samples collected at necropsies, revealed 35 positive animals (81,4%). So, all the diagnostic tests applied, showed lower sensitivity than the PCR technique of tissues. The authors concluded that the incidence of the disease in this Portuguese region was high and regarding the preventive measures and given the specific characteristics of the farms of this particular region the authors proposed: the conduct of surveys to identify animals carrying the disease, attention to verify the origin of the animals to acquire surveillance of symptoms shown by animals, isolation of lambs, the use of previously pasteurized colostrums, prevent the use of manure on fertilization of pastures.
- Resultado das técnicas de diagnóstico serológico – método ELISAPublication . Seixas, C.; Santos, C.; Esteves, F.; Albuquerque, T.; Vala, HelenaA primeira abordagem de diagnóstico laboratorial de Paratuberculose ovina consistiu numa pesquisa de anticorpos específicos anti-mycobacterium paratuberculosis através do método ELISA (Enzime Linked Immunosorbent Assay), em amostras de soro sanguíneo recolhidas nos animais das explorações em estudo. A primeira fase do estudo serológico consistiu no rastreio de 20% dos animais das 12 explorações incluídas no estudo. A segunda fase de pesquisa focou-se nas explorações onde se verificaram resultados positivos (10 explorações), sendo rastreados os restantes 80% dos animais. A pesquisa de anticorpos por este método revelou, em 2589 amostras analisadas, a presença de 235 amostras positivas (9,1%) e de 45 duvidosas (1,7%). A técnica ELISA foi aplicada recorrendo a dois kits comerciais existentes no mercado. Todas as amostras foram testadas individualmente com um kit ELISA de “screening”, sendo posteriormente testadas as amostras positivas e duvidosas com um kit ELISA de confirmação. Estas mesmas amostras foram ainda submetidas a análise com a técnica AGID (Agar Gel Immunodiffusion), que consiste igualmente na pesquisa de anticorpos específicos anti-Mycobacterium paratuberculosis, verificando-se a reacção entre o soro da amostra e o PPA (Antigénio Protoplasmático Paratuberculose), usando-se um soro positivo de referência, como termo de comparação. No total de amostras analisadas, observaram-se com esta técnica 30 resultados positivos. Das 12 explorações iniciais, apenas duas não apresentaram resultados serológicos positivos (ELISA ou AGID).
- Sheep paratuberculosis study in Portugal, Serra da Estrela region (preliminary results)Publication . Seixas, C.; Esteves, F.; Albuquerque, T.; Afonso, A.; Botelho, A.; Santos, C.; Vala, Helena; Amado, A.The aim of the project, started in September 2004 and with the duration of three years, is the study of Paratuberculosis incidence in sheep herds in one of the best Portuguese cheese production region. Every year producers suffer great economic losses due to the lack of control of the disease in their herds. Thirteen sheep herds were selected based in clinical signs of paratuberculosis disease. A serological survey by Elisa test, performed in 1220 animals, revealed that 5.6% were positive. Fourteen positive (9.7%) AGID tests, performed so far in 145 animals, were obtained. Post-mortem examination of these 14 animals revealed typical macroscopic lesions of paratuberculosis in all of them. Histophathological analysis showed suspected paratuberculosis microscopic lesions in seven animals. Bowel tissues with lesions, from the same 14 animals, were cultured in selective media for bacteriological analysis and also for direct detection with the ADIAVET kit. Seven tissue samples processed until now allowed the isolation of six strains, identified as Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis by bacteriologic conventional methods. To start the molecular epidemiological study of paratuberculosis these six strains, and others isolated in the future, will be typed by molecular methods using IS900 restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. This molecular approach will allow the detection of sources and routes of infection, essential for disease control. After these preliminary results, we intend to develop methods to rapidly detect Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in milk samples from infected and non infected sheep. With all the field and laboratory information and results gathered, it is our perspective, in three years from now, to have controlled paratuberculosis in sheep herds from Serra da Estrela region, and also to have a safe guaranty for the consumer of Serra da Estrela cheese.